[目的要求]1、學(xué)習(xí)和掌握用紫外分光光度法定性的原理和方法。2、學(xué)習(xí)紫外分光光度計(jì)的使用方法，了解基本結(jié)構(gòu)，掌握紫外分光光度法定量的原理和方法。

[基本原理]

紫外分光光度法其比較重要的用途是用于有機(jī)化合物的定性和定量分析方面。因?yàn)楹芏嘤袡C(jī)化合物及其衍生物在紫外波段有強(qiáng)的吸收光譜，可以把未知試樣的紫外吸收光譜圖和標(biāo)準(zhǔn)試樣(或與標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)圖譜)比較，當(dāng)濃度和溶劑相同時(shí)，若兩者的譜圖相同（峰、極小值和拐點(diǎn)的λ相同），而且未知樣品大體已知時(shí)，可以說(shuō)明它們是同一個(gè)化合物。但是在紫外和可見(jiàn)光區(qū)域，這些特征的峰、極小值和拐點(diǎn)的數(shù)目往往是有限的，且紫外吸收光譜的吸收峰還較寬，兩種不同的化合物可能有相同的紫外吸收光譜，對(duì)于*未知的有機(jī)化合物，有時(shí)可以通過(guò)改換溶劑和適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)處理之后所得的未知標(biāo)準(zhǔn)光譜對(duì)照，不僅比較λ，還要比較它們的λmax和A，來(lái)進(jìn)一步確證，甚至還要進(jìn)一步借助紅外、核磁和質(zhì)譜等手段才能后得出結(jié)論。    紫外分光光度法進(jìn)行定量分析是有快速，靈敏度高及分析混合物中各組份有時(shí)不需要事前分離，不需要顯色劑，因而不受顯色劑溫度及顯色時(shí)間等因素的影響，操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。目前廣泛用于微量或痕量分析中。但有一個(gè)局限性，就是待測(cè)試樣必須在紫外區(qū)有吸收并且在測(cè)試濃度范圍服從比耳定律才行。    利用紫外光度法測(cè)定試樣中單組份含量時(shí)，通常先測(cè)定物質(zhì)的吸收光譜，然后選擇大吸收峰的波長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)定。其原理與一般比色分析相同。可用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)法。如果通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明，在測(cè)定條件下符合比耳定律，也可以不用標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)而與標(biāo)準(zhǔn)品的已知濃度溶液比較求出未知樣品濃度。[儀器與試劑]

751G型，752型及53WB型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)；1 cm石英比色皿未知物1—環(huán)己烷溶液；未知物2—環(huán)己烷溶液；未知物3—乙醇溶液；未知物4—乙醇溶液；萘的標(biāo)準(zhǔn)溶液：（1）1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)萘溶液：準(zhǔn)確稱(chēng)取50毫克色譜純的萘于小燒杯中，以無(wú)水乙醇溶液溶解后定量移入50毫升容量瓶中，以無(wú)水乙醇稀至刻度，搖勻；（2）10 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)萘溶液，由1 mg/mL萘標(biāo)液準(zhǔn)確稀釋100倍即成；（3）1 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)萘溶液：由10 μg/mL萘標(biāo)液準(zhǔn)確稀釋10倍即成。

[實(shí)驗(yàn)步驟]

1、以試樣的溶劑為參比對(duì)未知芳香化合物的溶液測(cè)定，其紫外吸收光譜波長(zhǎng)一般從220 nm—300 nm。間隔自選（一般間隔1—2 nm）。    2、繪制出吸收曲線(xiàn)后從“Ultraiolet Spectra of Aromatic Compounds”（芳香族  化合物的紫外光譜）一書(shū)中的標(biāo)準(zhǔn)譜圖對(duì)照查出屬于何種有機(jī)化合物。    3、以95%乙醇為參比溶液，用1cm石英比色皿對(duì)標(biāo)準(zhǔn)萘—乙醇溶液測(cè)定紫外吸收光譜，波段從210 nm—230 nm，只要找出大吸收峰位置即可。    4、在儀器上以大吸收峰測(cè)定已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。    （1）用10 mL帶塞比色管6支，配制濃度分別為0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.5 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液系列各10 mL。    （2）在分光光度計(jì)上以大吸收峰波長(zhǎng)（～220 nm）測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)系列的吸光度，濃度從低到高，記錄吸收值。    5、對(duì)未知樣品進(jìn)行測(cè)定。    對(duì)幾個(gè)未知樣品中的萘含量進(jìn)行測(cè)定時(shí)的條件應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)系列一致。試樣中含量高，可用乙醇稀釋后測(cè)定。

[結(jié)果處理]

式中：C標(biāo)、C樣—分別為標(biāo)準(zhǔn)液和試樣中萘的濃度；

      A標(biāo)、A樣—分別為標(biāo)準(zhǔn)液和試樣液的吸光度；

      W樣—試樣重。

[注意事項(xiàng)]  （1）測(cè)定過(guò)程中比色皿應(yīng)加蓋子，并防止蓋子相互污染。  （2）讀數(shù)后立即關(guān)閉光閘，保護(hù)光電管。  （3）小心不要打破石英比色皿；比色皿光學(xué)玻璃面要用揩鏡紙擦。